Unterschied zwischen Nitrocellulose und PVDF

Während sowohl Nitrocellulose- als auch PVDF-Membranen für das Western Blot und die Aminosäureanalyse verwendet werden, ist Nitrocellulose ideal zum Nachweis von Proteinen mit niedrigem Molekulargewicht, während PVDF besser zum Nachweis von Proteinen mit höherem Molekulargewicht geeignet ist.

1. Was ist der Unterschied zwischen PVDF- und Nitrocellulosemembranen??
2. Was sind die Vor- und Nachteile von PVDF und Nitrocellulose??
3. Warum wird Nitrocellulose im Western Blot verwendet??
4. Was ist eine PVDF-Membran??
5. Wofür steht PVDF??
6. Warum tränken Sie die PVDF-Membran in Methanol??
7. Wie halten Sie PVDF-Membranen??
8. Kann Protein durch die PVDF-Membran gelangen??
9. Wie aktiviert man die Nitrocellulosemembran??
10. Warum wird Glycin im Laufpuffer verwendet??
11. Was ist die Porengröße von Nitrocellulose?
12. Was ist das Prinzip des Western Blot??

Was ist der Unterschied zwischen PVDF- und Nitrocellulosemembranen??

PVDF-Membranen haben eine höhere Proteinbindungskapazität als Nitrocellulose. Die Proteinbindungskapazität von PVDF reicht von 150 bis 200 ug Protein / cm² und Nitrocellulose reicht von 80 bis 100 ug Protein / cm². Obwohl PVDF eine höhere Bindungskapazität aufweist, kann dies unter bestimmten Umständen zu einem erhöhten Hintergrund führen.

Was sind die Vor- und Nachteile von PVDF und Nitrocellulose??

3. Was sind die Vor- und Nachteile von PVDF und Nitrocellulose? PVDF ist ein hochgradig nicht reaktiver Kunststoff, der Proteine ​​aufgrund seiner unspezifischen Affinität zu Aminosäuren immobilisiert. PVDF wird gegenüber Nitrocellulose bevorzugt, da es eine bessere Proteinretention, Festigkeit und chemische Verträglichkeit bietet.

Warum wird Nitrocellulose im Western Blot verwendet??

Nitrocellulosemembranen sind eine beliebte Matrix, die beim Protein-Blotting verwendet wird, da sie eine hohe Proteinbindungsaffinität aufweisen, mit einer Vielzahl von Nachweismethoden (Chemilumineszenz, Chromogenität und Fluoreszenz) kompatibel sind und Proteine, Glykoproteine ​​oder Nukleinsäuren immobilisieren können.

Was ist eine PVDF-Membran??

Polyvinylidenfluorid (PVDF) -Membranen binden Biomoleküle durch hydrophobe Wechselwirkungen. Membranporen vergrößern die Oberflächenbindungsfläche und beschränken gleichzeitig die Größe gebundener Proteine. ... Es hat eine höhere Proteinbindungskapazität und eine höhere Retention als 0,45 µm Membranen.

Wofür steht PVDF??

PVDF ist die Abkürzung für Polyvinylidenfluorid, das auch als PVF2 bezeichnet werden kann. Dieses Polymer gehört zu einer Klasse von Materialien, die als Fluorkohlenwasserstoffe oder Fluorpolymere bekannt sind und sich durch hohe thermische Stabilität und ausgezeichnete chemische Beständigkeit auszeichnen.

Warum tränken Sie die PVDF-Membran in Methanol??

Eine kurze Spülung (15 bis 30 Sekunden) in Methanol (oder einem anderen 100% igen Alkohol (Ethanol oder Isopropanol)) vor dem Western-Transfer "hydratisiert" die Membran und ermöglicht einen verbesserten Transfer und eine verbesserte Proteinbindung. Nitrocellulosemembranen sind hydrophil und können daher durch wässrige Puffer vollständig hydratisiert werden.

Wie halten Sie PVDF-Membranen??

Um die durch Protein übertragene NC- oder PVDF-Membran länger zu lagern, ist es besser, die Membran zu trocknen und dann bei -20 zu halten^ÖC ohne zu falten. Bei PVDF-Membranen einfach vor dem Blotten mit Methanol abspülen.

Kann Protein durch die PVDF-Membran gelangen??

Der anfängliche Transfer, der über Nacht (16 Stunden) bei 30 V durchgeführt wurde, schlug fehl, weil kleine und mittelgroße Proteine ​​(kleiner als 100 kDa) direkt durch die Membran übertragen wurden (wie aus der Ponceau-Färbung des Blots und der Coomassie-Färbung des Gels ersichtlich)..

Wie aktiviert man die Nitrocellulosemembran??

Sie erwähnten Folgendes: Nitrocellulose - Legen Sie die Membran einige Minuten lang direkt in eine flache Schale mit 50 ml 1X Transferpuffer. Filterpapier - Tauchen Sie das Filterpapier unmittelbar vor der Verwendung kurz in 1X Transfer Buffer. Gel - Verwenden Sie das Gel unmittelbar nach dem Lauf.

Warum wird Glycin im Laufpuffer verwendet??

Glycin befindet sich im Laufpuffer, der typischerweise einen pH-Wert von 8,3 aufweist. ... Wenn ein elektrisches Feld angelegt wird, treffen Glycinatanionen auf den Stapelpuffer mit einem pH-Wert von 6,8 und verwandeln sich in meist neutral geladene Glycin-Zwitterionen. Das heißt, sie bewegen sich aufgrund ihres Ladungsmangels langsam durch die Stapelschicht in Richtung Anode.

Was ist die Porengröße von Nitrocellulose?

Die 0,2 µm große Nitrocellulosemembran mit einer Porengröße von Bio-Rad besteht zu 100% aus dichter Nitrocellulose. Reine Nitrocellulose ist die am häufigsten verwendete Membran für den Transfer von Proteinen und Nukleinsäuren.

Was ist das Prinzip des Western Blot??

Western Blot (Protein Blot oder Immunoblot) ist ein schneller und empfindlicher Assay zum Nachweis und zur Charakterisierung von Proteinen. Es basiert auf dem Prinzip der Immunochromatographie, bei der Proteine ​​entsprechend ihrem Molekulargewicht in Polyacrylamidgel getrennt werden.